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植物ACC合成酶(ACS)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書
發(fā)布時間:2025/5/21瀏覽:232次
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  以下是植物ACC合成酶(ACS)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明:

  BS-7993  植物ACC合成酶(ACS)ELISA試劑盒

  一、實(shí)驗(yàn)原理

  采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。預(yù)先包被植物ACC合成酶(ACS)抗體的微孔板中依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品和HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)溫育洗滌后,TMB底物在過氧化物酶催化下顯色(藍(lán)色→黃色),顏色深淺與ACS含量呈正相關(guān),通過450nm波長測定OD值計(jì)算濃度。

  二、樣本處理

  血清?:無熱原試管采集,避免細(xì)胞刺激,1000×g離心10分鐘分離;

  血漿?:EDTA/檸檬酸鹽/肝素抗凝,3000×g離心30分鐘取上清;

  細(xì)胞上清液?:3000×g離心10分鐘去除顆粒;

  組織勻漿?:生理鹽水搗碎后離心取上清;

  保存?:分裝凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融。

  三、試劑盒組成

  組分 規(guī)格 數(shù)量

  30倍濃縮洗滌液 20ml 1瓶

  酶標(biāo)試劑 6ml 1瓶

  酶標(biāo)包被板 12孔×8條 1板

  標(biāo)準(zhǔn)品 0.5ml 1瓶

  顯色劑A/B液 各6ml 各1瓶

  終止液 6ml 1瓶

  四、操作步驟

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?:按說明書梯度稀釋原倍標(biāo)準(zhǔn)品;

  加樣?:

  空白孔:不加樣品

  標(biāo)準(zhǔn)孔:50μl標(biāo)準(zhǔn)品

  樣本孔:40μl稀釋液+10μl樣本(5倍稀釋);

  溫育?:37℃孵育30分鐘,封板膜覆蓋;

  洗滌?:棄液后加滿洗滌液,靜置30秒重復(fù)5次,拍干;

  顯色?:每孔加顯色劑A/B液各50μl,37℃避光顯色10分鐘;

  終止?:每孔加50μl終止液;

  檢測?:5分鐘內(nèi)于450nm讀取OD值。

  五、注意事項(xiàng)

  試劑盒保存于2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘;

  濃縮洗滌液結(jié)晶需水浴加熱溶解;

  結(jié)果計(jì)算時需乘以稀釋倍數(shù)(如5倍);

  不同批號組分不可混用(洗滌液/終止液除外)。

  六、自備器材

  酶標(biāo)儀(450nm)

  移液器(0.5-1000μL范圍)

  37℃恒溫箱。

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