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人角化細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書
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BS-0186 人角化細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)ELISA試劑盒
一、實(shí)驗(yàn)原理
采用雙抗體夾心法(或雙抗原夾心法)檢測(cè)樣本中KGF濃度。通過包被抗體/抗原與待測(cè)物結(jié)合，再與酶標(biāo)抗體形成復(fù)合物，經(jīng)TMB顯色后測(cè)定OD值，濃度與顏色深淺成正比。
二、試劑盒組成
主要組分?
預(yù)包被微孔板(96孔或48孔)
標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉，通常含2-8管，濃度0-400 pg/mL不等)
酶標(biāo)抗體、生物素化抗體、HRP標(biāo)記親和素(不同品牌配置差異)
TMB底物液、終止液(2N H?SO?)
濃縮洗滌液(需20-30倍稀釋)
自備物品?
酶標(biāo)儀(450nm)、移液器及槍頭
37℃恒溫箱、蒸餾水
三、樣本處理
樣本類型 處理方法
血清? 室溫凝固10-20分鐘后，2000-3000rpm離心20分鐘，避免溶血
血漿? EDTA/肝素抗凝，離心后取上清
細(xì)胞上清? 1000-3000rpm離心10-20分鐘去除顆粒
組織勻漿? PBS勻漿后離心取上清，分裝保存于-20℃
注意?：避免反復(fù)凍融;NaN?會(huì)抑制HRP活性，需排除此類樣本。
四、操作步驟
試劑準(zhǔn)備?
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶：加入指定體積稀釋液(如0.5-1mL)，靜置10分鐘混勻。
洗滌液稀釋：按1:19~1:20比例用蒸餾水配制。
檢測(cè)流程?
加樣：標(biāo)準(zhǔn)品/樣本每孔50-100μL。
孵育：37℃溫育60-120分鐘。
洗板：手工或洗板機(jī)洗滌4-6次，拍干。
加酶標(biāo)抗體：每孔100μL，37℃孵育60分鐘。
顯色：加入TMB底物，避光反應(yīng)15分鐘。
終止：加入終止液后15分鐘內(nèi)測(cè)定450nm OD值。
五、注意事項(xiàng)
保存條件?：未開封試劑盒2-8℃保存;溶解后標(biāo)準(zhǔn)品建議分裝凍存。
精密度?：批內(nèi)CV<10%，批間CV<12%。
干擾因素?：溶血、細(xì)菌污染、反復(fù)凍融可能導(dǎo)致假陽(yáng)性或濃度偏差。
注：以上資料僅供參考，如需具體品牌說(shuō)明可進(jìn)一步提供貨號(hào)查詢?cè)敿?xì)參數(shù)。
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